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過氧化氫酶(Catalase，CAT)又稱觸酶，是一類以鐵卟啉為輔基的結合酶，由四個相同亞單位組成的四聚體酶，共含4分子的亞鐵血紅素作為輔基，分子量約為24KD。CAT能將細胞代謝產生的毒性物質過氧化氫迅速清除，可與GSH-Px共同保護巰基酶、膜蛋白、過氧化氫解離。

Leagene 過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒(紫外法)其檢測原理是血清或血漿等樣品H2O2在240nm處有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過H2O2，使待測溶液吸光度隨反應時間而減少，通過紫外分光光度計檢測240nm處吸光度，根據測定吸光度的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。紫外法又稱紫外分光光度計發或紫外吸收法，該酶的檢測對于研究植物代謝強度及抗旱、抗病能力有一定的價值。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、 蒸餾水、生理鹽水

2、 比色杯

3、 分光光度計

4、 低溫離心機

操作步驟(僅供參考)：

1、 配制CAT Assay buffer工作液：按 CAT Assay buffer(2.5×)：蒸餾水=1.5：1的比例稀釋，即獲得CAT Assay buffer工作液，4℃預冷，待用。

2、 配制100mM H2O2基液：本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過氧化氫不是非常穩定，使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用CAT Assay buffer工作液稀釋100倍，使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。分光光度計測定A240，H2O2濃度(mM)=22.94×A240。而計算出本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2的實際濃度。然后再根據實際的過氧化氫濃度，配制100mMH2O2基液。

3、 準備樣品：

細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行裂解，可以采用Leagene Western及IP細胞裂解液。如為植物樣品或動物組織樣品可按下列步驟操作。

   a、取植物樣品0.4-0.5g或動物組織樣品，加入預冷的CAT Assay buffer工作液2ml，研磨勻漿，轉移至15ml離心管。再用CAT Assaybuffer工作液沖洗研磨器，合并沖洗液至該離心管，補加CAT Assay buffer工作液至10ml刻度。

   b、混勻，4℃冰箱中靜置10min，轉移離心管上部的清液至新的離心管中，

   c、4500g離心15min，上清液即為過氧化氫酶提取液。-70℃凍存，用于CAT的檢測。

血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備，用生理鹽水10倍稀釋后，可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-70℃凍存，亦可4℃短期保存，用于CAT的檢測。

高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的CAT，可以使用CAT Assay buffer工作液稀釋。

(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計算單位蛋白重量組織或細胞內的CAT含量。

4、 CAT檢測：按照下表設置空白管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測需要設置平行復測管。

5、加入100mM H2O2基液 30ml，每加完一管立即計時，并迅速倒入石英比色皿中，在240nm下測定吸光度，每隔1min讀數1次，共測4次，待全部測定完畢后，計算酶活力。

蒸餾水調零，讀取各管吸光度值。一般應數小時內檢測完畢。

注意事項：

待測樣品中不能含有CAT抑制劑，同時需避免反復凍融。

CAT Assay buffer如果出現渾濁或絮狀物，應棄用。

完整的紅細胞以及未稀釋的溶血液中的過氧化氫酶置于4℃一周仍然很穩定，稀釋后的溶血液中CAT容易失活。

盡量避免冰凍樣品造成溶血，否則過氧化氫酶活性會下降10%-15%。

血清樣品室溫下3天內活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性僅下降3.5%。因此，待測樣品均應-20℃或-70℃保存。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。