ELISA試劑盒有著準確性高、活絡度高、特異性強的許多長處，在試驗室的應用現(xiàn)已相當遍及，絕大多數(shù)是用于檢測不知道樣本中抗原的濃度。現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進口，數(shù)量繁復令人眼花繚亂，并且質量也是良莠不齊，那么咱們怎樣才能選出適用的產(chǎn)品呢？首要要依據(jù)咱們所要檢測的分子進行檢測，除此以外也還有一些需求加以考量的要素，下面就為咱們供給幾點參閱。

1. 試驗類型

ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個一起特色，就是進行抗原捕獲。一般捕獲方法包含將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑駁ELISPOT是兩種特別的類型，In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細胞進行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細胞，然后在膜上檢測細胞排泄的抗原構成斑駁。此外，咱們還需求依據(jù)本身需求挑選96孔板或是384孔板進行ELISA試驗。

一般人們運用雙抗夾心法進行ELISA試驗，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間，這種辦法既活絡又有效，受到了許多研究者的喜愛。不過有時候雙抗夾心法并不是挑選，例如有時候抗原特別小讓兩個大抗體難以附著，又或許抗體只要一個抗體結合位點。在上述情況下，競賽性ELISA就更為適用，這種辦法是選用帶符號的純化抗原與樣本中無符號的抗原進行競賽，以結合捕獲抗體。

2. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實際上有時候二者結合效果更好。例如，關于雙抗夾心法而言，用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體（不管多抗還是單抗）的配對很有考究。咱們不期望捕獲抗體與檢測抗體競賽抗原上的同一位點，為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢測抗體所辨認的抗原表位不存在重疊。假如捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了抵觸，就會對試驗成果發(fā)生較大影響。要防止這一問題，咱們能夠挑選購買“matched pair"的捕獲/檢測抗體對，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗證才引薦的好組合。

3. 穿插反響

假如抗體間發(fā)生抵觸或穿插反響就會影響整個試驗的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性就是穿插反響的一個要素。雖然現(xiàn)在購買源自指定動物的抗體越來越容易，咱們仍有必要承認一下是否會發(fā)生穿插反響的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時，檢測用的二抗有必要特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反響。假如檢測用二抗與捕獲抗體結合，試驗特異性就會大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來防止上述問題。

與此同時，了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測成果收到影響。

4. 檢測方法

如今檢測ELISA有許多途徑，咱們能夠依據(jù)自己的偏好進行挑選。一般ELISA檢測的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上結合有相應的酶（例如一般運用的辣根過氧化物酶HRP），而反響系統(tǒng)中增加有相應的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠經(jīng)過分光光度計進行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠結合在一抗上，ELISA試劑盒也能夠結合在二抗上，還能夠運用鏈霉親和素符號的酶與親和素符號的一抗結合。此外ELISA的成果檢測還包含放射性檢測、熒光檢測、化學發(fā)光或顯色法檢測等。