ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的許多長處，在試驗(yàn)室的應(yīng)用現(xiàn)已適當(dāng)普及，絕大多數(shù)是用于檢測(cè)不知道樣本中抗原的濃度。現(xiàn)在市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口，數(shù)量繁復(fù)令人目不暇接，并且質(zhì)量也是良莠不齊，那么咱們?cè)鯓硬拍苓x出zui適用的產(chǎn)品呢？首先要依據(jù)咱們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè)，除此以外也還有一些需求加以考量的要素，下面就為咱們供給幾點(diǎn)參考。

1. 試驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型，不過它們都有一個(gè)一起特色，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特別的類型，In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培育細(xì)胞，然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原構(gòu)成斑點(diǎn)。此外，咱們還需求依據(jù)本身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。

一般人們運(yùn)用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間，這種辦法既靈敏又有用，受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是*挑選，例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著，又或許抗體只要一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下，競(jìng)賽性ELISA就更為適用，這種辦法是選用帶符號(hào)的純化抗原與樣本中無符號(hào)的抗原進(jìn)行競(jìng)賽，以結(jié)合捕獲抗體。

2. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合作用更好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲一切抗原，隨后單抗再特異性檢測(cè)具有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體（不論多抗還是單抗）的配對(duì)很有考究。咱們不期望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)賽抗原上的同一位點(diǎn)，為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在堆疊。假如捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突，就會(huì)對(duì)試驗(yàn)成果發(fā)生較大影響。要防止這一問題，咱們能夠挑選購買“matched pair"的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì)，這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才引薦的好組合。

3. 穿插反響

假如抗體間發(fā)生沖突或穿插反響就會(huì)影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性就是穿插反響的一個(gè)要素。雖然現(xiàn)在購買源自指定動(dòng)物的抗體越來越容易，咱們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是否會(huì)發(fā)生穿插反響的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)用的二抗有必要特異性針對(duì)檢測(cè)一抗，而不能與捕獲抗體起反響。假如檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合，試驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗，來防止上述問題。

與此同時(shí)，了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的（例如washing buffer和blocking buffer），避免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分，使檢測(cè)成果收到影響。

4. 檢測(cè)方法

現(xiàn)在檢測(cè)ELISA有許多途徑，咱們能夠依據(jù)自己的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過氧化物酶HRP），而反響系統(tǒng)中增加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。這種酶促反響生成具有特征性的色彩，能夠經(jīng)過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠結(jié)合在一抗上，ELISA試劑盒也能夠結(jié)合在二抗上，還能夠運(yùn)用鏈霉親和素符號(hào)的酶與親和素符號(hào)的一抗結(jié)合。此外ELISA的成果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。